E. faecium contendo o gene vanA foi a primeira espécie de VRE descrita, no Brasil. Apesar disto, E. faecalis resistente a vancomicina tem se tornado a espécie predominante nos hospitais brasileiros.O objetivo desse estudo foi avaliar a relação genética de VREs isolados em um hospital de ensino brasileiro após oito anos de seu primeiro isolamento. Analisamos 37 isolados de VRE obtidos de 81 culturas de vigilância de pacientes admitidos nas quatro maiores Unidades de Tratamento Intensivo em Fevereiro de 2006. A presença do gene vanA foi analisada por PCR e a caracterização molecular por PFGE. Todas as amostras VRE carreavam o gene vanA. Entre os E. faecalis vancomicina-resistentes, dois distintos grupos clonais foram observados. E. faecium resistente a vancomicina pertencentes a cinco clones distintos foram demonstrados por tipagem molecular. Todos esses clones foram diferentes do primeiro clone de enterococo resistente a vancomicina isolado oito anos atrás em nosso hospital.

E. faecium was the first reported VRE species, carrying the vanA gene in Brazil. In spite of this, vancomycin-resistant E. faecalis has become the predominant species in Brazilian hospitals. The aim of this study was to evaluate the genetic relatedness of VREs isolated in a Brazilian teaching hospital eight years apart from its first isolation. We analyzed 38 VRE strains obtained from 81 surveillance cultures of patients admitted to the four largest intensive care units in Hospital São Paulo in February, 2006. Presence of the vanA gene was assayed by PCR and PFGE analysis was used for molecular characterization. All VRE strains carried the vanA gene. Two distinct clonal groups were observed among vancomycin-resistant E. faecalis. Vancomycin-resistant E. faecium belonged to five distinct clones were demonstrated by molecular typing. All of these clones were different from the first vancomycin-resistant enterococci clone isolated eight years ago in our hospital.

Stenotrophomonas maltophilia é um bacilo Gram-negativo, conhecido como importante patógeno nosocomial. O principal objetivo desse estudo foi avaliar a relação genética, através da análise randômica do polimorfismo de DNA (RAPD) e eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE), de 86 isolados clínicos de S. maltophilia (22 de colonização, 64 de infecção) obtidos de 79 pacientes hospitalizados em diferentes regiões geográficas do estado de São Paulo. A análise genotípica foi realizada através da técnica RAPD e o PFGE foi usado em 24 isolados para confirmar a identidade genética dos mesmos. Os resultados foram coerentes entre os dois métodos, mas não foi possível correlacionar um perfil genético com as variáveis estudadas, estado clínico e área geográfica, provavelmente pela ampla variabilidade entre as linhagens. A análise por PFGE confirmou a identidade genética em 5 pares de microrganismos e o RAPD, neste estudo, mostrou ser uma ferramenta útil para investigação da diversidade, possibilitando identificar 85 perfis genéticos. A diversidade genética observada através do RAPD pode ser devido à re-infecção por diferentes linhagens ou co-infecção por linhagens distintas, sugerindo múltiplas fontes de entrada da bactéria no hospital ou de aquisição pelo paciente. Nesse ambiente, a colonização, infecção e re-infecção ocorrem com freqüência, o que leva à necessidade do estabelecimento de medidas de controle específicas.

Stenotrophomonas maltophilia is a Gram-negative bacillus, which is becoming widely recognized as an important nosocomial pathogen. The main objective of this study was to evaluate the genetic relatedness, by random amplified polymorphic DNA (RAPD) and pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) of 86 clinical isolates of S. maltophilia (colonization 22, infection 64) obtained from 79 hospitalized patients, from different geographic regions of São Paulo State. The genotypic analysis performed by RAPD and PFGE was used in 24 isolates for genetic identity confirmation. The results were congruent between the two methods but it was not possible to link genetic profiles with the studied variables, clinical state and geographic area, probably due to the great variability among the strains. The analyses by PFGE confirmed identity in 5 pairs of microorganisms and RAPD, in this study, showed to be a useful tool for investigation of diversity leading the identification of 85 genetic profiles. The genetic diversity shown may be due to re-infection by different strains or co-infection by multiple strains which suggests multiple entry sources of the bacterium in the hospital setting or of acquisition by patient. In this setting, colonization, infection and re-infection occur with unknown frequency, raising the need for the establishment of specific control measures.

Antimicrobial resistance has increased rapidly in Brazil and worldwide during the past few years, giving rise to a growing necessity for antimicrobial resistance surveillance programs. These programs have been instituted in order to monitor bacterial resistance in various regions, and to guide empirical antimicrobial therapy. We evaluated the use of molecular typing in multicenter surveillance programs. We also studied the dissemination modes of selected resistance profiles. Antimicrobial susceptibility to various antimicrobial agents was evaluated by the reference broth microdilution method. Bacterial isolates with selected susceptibility patterns were characterized by pulsed field-gel electrophoresis (PFGE). A total of 119 Gram-negative bacteria were molecularly typed, including 22 imipenem-resistant Pseudomonas aeruginosa, 26 ESBL-producing Escherichia coli, 27 cefoxitin-resistant-ESBL-producing Klebsiella pneumoniae, 33 Enterobacter spp., 8 Citrobacter spp., and 3 S. marcescens isolates resistant to ceftazidime. The isolates were from clinically apparent bacteremia of patients hospitalized in medical centers located in 13 cities of 11 Brazilian states. Our molecular typing results revealed a great genetic diversity among isolates of the same species. However, some major PFGE patterns were found in more than one isolate. All repeated PFGE patterns were detected in only 2 isolates, which were isolated within the same institutions or in different medical centers. We conclude that the ability to characterize organisms phenotypically and genotypically is a powerful epidemiologic tool and it provides unique information that is very important for multicenter surveillance programs.

Introdução: O teste de suscetibilidade a antimicrobianos representa um dos testes de maior importância clínica realizados pelo laboratório de microbiologia. Devido ao grande número de antimicrobianos e à complexidade dos mecanismos de resistência desenvolvidos pelas bactérias, fica muito difícil hoje a detecção de problemas nos testes de suscetibilidade pela simples avaliação dos resultados obtidos. Sendo assim, é extremamente importante que haja uma avaliação constante da qualidade destes testes. Objetivo: O objetivo do presente estudo foi avaliar a qualidade dos discos de antimicrobianos comercializados no Brasil. Material e métodos: Foram avaliados discos de 18 antimicrobianos obtidos de cinco diferentes fontes comerciais, os quais foram testados frente a quatro cepas bacterianas oriundas da ATCC, pelo método de difusão em ágar, seguindo as recomendações do National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Cada teste foi repetido 20 vezes. Resultados: Nenhuma das marcas apresentou desempenho satisfatório para o uso na rotina de um laboratório de microbiologia. O melhor desempenho foi apresentado pela marca Cecon®, com 89,6% de concordância. A marca Sensifar® apresentou taxa de concordância geral semelhante (90,8%). A marca com o pior desempenho foi a Pimenta Abreu®, com apenas 58,6% de concordância. Conclusão: Os resultados do presente estudo indicam que os discos de antimicrobianos comercializados no Brasil são de baixa qualidade, possivelmente refletindo a falta de controle de qualidade na produção e/ou estocagem dos produtos antes da sua distribuição. Esses dados chamam a atenção para a necessidade de implantação de sistemas efetivos de fiscalização da comercialização desses produtos e de programas criteriosos de controle de qualidade por parte dos laboratórios que os utilizam.

Background: The antimicrobial susceptibility test is one of the most important clinical test carried out in the microbiology laboratory. Due to the great number of antimicrobial agents and the complexity of resistance mechanisms evolved, it has become very difficult to detect problems in these tests by simply evaluating the results obtained. Consequently, a quality control program must be performed continuously. Objective: The objective of the present study was to evaluate the quality of the antimicrobial susceptibility disks used in Brazil. Methods: Eighteen antimicrobial susceptibility disks manufactured from five commercial trade marks were evaluated. These antimicrobial disks were tested against four ATCCs and following the National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS) procedures for disk-diffusion. Each test was repeated 20 times. Results: None of the trade marks presented a satisfactory performance for routine use in a microbiology laboratory. The best performance was presented by Cecon®, with 89,6% of overall agreement. Sensifar® disks showed a similar overall concordance of 90,8%. The trade mark with the least adequate performance was Pimenta Abreu®, with only 58,6% overall agreement. Conclusion: The results from this study indicate that the disks commercialized in Brazil are inappropriate to be used in clinical microbiology laboratories showing lack of quality control during the process of production and/or storage. They also show the importance of the implementation of both external and internal quality control programs.